为了检验该菌株在大生产中的应用情况,我所与四川郎酒集团有限责任公司组成了联合研究小组,开展了浓香型酒酯化酶工程的研究与应用。
1.选育方法
该项目采用系统选育与诱变选育、实验室酯化性能测定与生产应用效果检验,以及制曲试验与酿酒试验相结合的选育方法。试验材料以四川省农科院水稻高粱研究所生物中心选育保藏的9株具有一定酯化能力的功能微生物为基础,经性能检测,筛选出性能较优的21号菌,并以此为出发菌株,进行紫外线诱变处理。通过反复筛选,较终筛选出了酯化酶活力比出发菌株高9.17%的优良酯化菌21-3。
2.21-3酯化菌的特征、特性
2.1 特征
在麦芽汁琼脂培养基上培养,菌落蔓延生长,有辐射纹,菌丝,呈枇杷黄色,菌落边缘白色,背面凋叶棕色,老熟后气生菌丝絮状,呈淡黄色,长达3mm―4mm,背面深橙黄色;在MEA培养基上,培养初期呈杏黄色,絮状白色气生菌丝长4mm―5mm,菌落背面呈橘橙色,老熟后颜色渐至密,黄色间白色,气生菌丝长约6mm;在CYA培养基上培养,菌落蔓延扩展,菌丝极丰富,呈象牙黄,有同心环纹,中央气生菌丝呈白色,毡状,边缘带较宽,约8mm,老熟后菌落颜色渐至桃粉红色,气生菌丝絮状至毡状,背面为玉粉红色。
镜检形态:气生菌丝无色,分隔4-8μm;分生孢子罕见,单生,梨形,7.5μm×10.5μm;被子器大量形成无色,球形,45-55-65μm;子囊孢子无色,卵形,4.5-5μm×6.5-7μm。
2.《 华 夏 酒报》全年订价156元2 特性
2.2.1 稳定性
经反复多代转接,21-3的酶活力及生长速度等性能稳定。
2.2.2 易培养
21-3作大生产菌种种子,以麸皮为原料效果佳。
2.2.3 具有较强的己酸乙酯合成能力
该菌株有利用促进己酸、丁酸及混合酸与乙醇的酯化作用,生成以己酸乙酯为主体的酯类物质,有利于保证和提高浓香型酒的质量。
2.2.4 酯化性能强
该菌株具有较强的酯化能力,酯化力远远高于曲药,其酯化力约为低温曲和次高温曲的2.1倍,为高温曲的12.5倍。制曲时将21-3酯化菌强化在曲药生产中,在曲块中能较好地生长繁殖,生产出的成品曲药酯化菌的数量显著高于对照曲,其酯化力比对照曲高3.79倍。
2.2.5 出酒率高、酒质好
21-3酯化菌生产的酯化曲用于酿酒,在用曲量减少4.5个百分点的情况下,出酒率仍提高了4.16个百分点;酯化曲生产的酒,其己酸乙酯含量在正常用曲量的情况下,比对照曲提高14.8%;在用曲量减少4.5个百分点的情况下,也比对照曲提高11.89%。
3.21-3酯化菌的增殖因子及大生产培养工艺
3.1 酯化菌增殖因子
21-3是好氧微生物,在氧气充足的条件下,生长代谢旺盛,喜爱乳酸,其较适剂量为0.5%。此时,酯化酶活力比对照高10%以上;适量的乙醇对21-3生长有利,并且21-3与乳酸菌共栖有利于酯化酶的合成。
3.2 21-3酯化菌大生产培养工艺参数
以麸皮为原料,加入70%的水,接种量为5%,同时加入0.5%的乳酸和2%的乙醇。在氧气充足的条件下,32℃培养48h―72h,成熟烘干备用。
4.推广应用
2004年起,我所便应用酯化酶工程技术研制生产优质曲药,并将生产的酯化曲药应用于郎酒集团浓香型白酒生产,在减少用曲量,提高出酒率的酒质等方面取得了显著效果。(任道群 唐玉明 姚万春 卓毓崇 李秀 徐克赞)
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